蛋白質(zhì)-細(xì)胞相互作用實時定量分析系統(tǒng)

蛋白質(zhì)-細(xì)胞相互作用實時定量分析系統(tǒng)

品牌介紹：

研發(fā)團(tuán)隊
十年前，烏普薩拉大學(xué)研發(fā)團(tuán)隊發(fā)明了SPR技術(shù)，現(xiàn)已成為大分子相互作用研究的*。2011年該團(tuán)隊LigandTracer Green的發(fā)布，*實現(xiàn)了以熒光標(biāo)記檢測方法在細(xì)胞和組織水平上進(jìn)行實時蛋白互作研究，為藥物研發(fā)、腫瘤研究、病毒研究及蛋白質(zhì)組學(xué)提供強(qiáng)大可靠的實時分析數(shù)據(jù)。LigandTracer系列產(chǎn)品成為目前*專業(yè)的蛋白-細(xì)胞相互作用實時分析系統(tǒng)，相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)表于Nature以及病毒學(xué)、核醫(yī)學(xué)的*期刊。

Ligandtracer產(chǎn)品系列：

Ligandtracer Green：可滿足幾乎所有實驗室研究要求，采用便捷的熒光標(biāo)記檢測

Ligandtracer Grey：為使用¹²⁵I標(biāo)記的同位素實驗室設(shè)計

Ligandtracer Yellow：為使用¹¹¹In,¹⁷⁷Lu,¹⁸F, ¹¹C ¹³¹I和類似標(biāo)記的同位素實驗室設(shè)計

Ligandtracer White：為使用¹⁴C, ³⁵S, ³²P, ³³P ,¹³¹I和正電子放射體 (比如 ¹⁸F)標(biāo)記的實驗室設(shè)計

蛋白質(zhì)-細(xì)胞相互作用實時定量分析系統(tǒng)

產(chǎn)品說明：

Ligandtracer應(yīng)用

蛋白質(zhì)是生命功能的主要執(zhí)行者，許多蛋白質(zhì)的功能發(fā)揮是通過蛋白質(zhì)相互作用實現(xiàn)的。人類細(xì)胞中約有7000種蛋白質(zhì)，其中30%在細(xì)胞膜上，控制細(xì)胞分子運作機(jī)制的信號有60%-70%由這些膜蛋白產(chǎn)生，但膜蛋白很難提純，現(xiàn)有的檢測大多是將膜蛋白從其所處環(huán)境中分離，這些方法不僅昂貴耗時，還可能會影響目標(biāo)膜蛋白的功能。此外，蛋白互作是非共價結(jié)合的動態(tài)過程，有相互作用往往很弱，不易檢測到，甚至有些蛋白結(jié)合或解離的時間很短，使常規(guī)的檢測方法受限。

親和力是生物分子反應(yīng)達(dá)到平衡（穩(wěn)態(tài)）時的理論，它反映結(jié)合的強(qiáng)度。動力學(xué)是研究分子間是怎樣相互作用并達(dá)到穩(wěn)態(tài)的，反映結(jié)合的快慢。有些配體受體互作有相同的親和力，卻顯示不同的動力學(xué)。這些動力學(xué)相關(guān)的信息在新藥篩選方面會更加有用，

LigandTracer為科學(xué)家提供了一個無需分離膜蛋白、在細(xì)胞水平上即可檢測蛋白功能的平臺，此外它還能在組織或蛋白水平檢測靶蛋白質(zhì)和其他多種生物分子之間的相互作用，并進(jìn)行實時動力學(xué)和親和力研究。LigandTracer是*可以實時定量蛋白細(xì)胞互作的系統(tǒng)，也是*實現(xiàn)定
量細(xì)胞表面受體數(shù)量的系統(tǒng)。

LigandTracer系統(tǒng)應(yīng)用于配基-受體的相互作用、抗原-抗體相互作用的免疫學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、醫(yī)學(xué)診斷、藥物研發(fā)和篩選、疾病治療等研究，涵蓋了蛋白-蛋白互作、蛋白-細(xì)胞/組織切片互作、病毒-細(xì)胞互作、藥物分子-細(xì)胞互作、細(xì)菌-細(xì)胞的結(jié)合。
﹡動力學(xué)分析：抗體特異性、抗體與細(xì)胞的親和力、抗體的親和-解離速率（Kd常數(shù)）、抗體的結(jié)合濃度
﹡細(xì)胞表面受體定量
﹡抗體評價：親和力及特異性測定
﹡藥物研發(fā)：EC50、Emax，細(xì)胞周期研究中同步化的檢測（同位素標(biāo)記）
﹡疾病治療：癌分子靶向治療藥物療效監(jiān)測，抗輻射條件下DNA的合成與修復(fù)

Ligandtracer功能

親和力和動力學(xué)測定

LigandTracer可以實時檢測蛋白互作過程，因此即使對有相同的親和力但結(jié)合解離不同的動力學(xué)過程也能捕獲準(zhǔn)確信息。通過比較不同濃度標(biāo)記蛋白的信號峰值可計算細(xì)胞和蛋白相互作用的親和力大小。另外通過吸附與截留實驗，可以檢測蛋白結(jié)合解離過程，得到其動力學(xué)參數(shù)。

三種不同濃度標(biāo)記配體與受體結(jié)合，平滑曲線代表了與之匹配的互作類型

高親和力結(jié)合的孵育時間的確定

對于高親和力抗體尤其一些治療藥物如 K_D <1 nM，常規(guī)方法所用孵育時間往往達(dá)不到假定的反應(yīng)平衡而導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。而LigandTracer實時捕獲結(jié)合解離信息，不再依賴于反應(yīng)達(dá)到平衡，大大降低了實驗的盲目性和不確定性，避免了錯誤的實驗結(jié)果。

LT Green檢測FITC標(biāo)記pertuzumab與SKOV3細(xì)胞HER2受體結(jié)合，Alexa Fluor ® 488標(biāo)記cetuximab 與U343細(xì)胞EGFR結(jié)合。結(jié)果：即使抗體濃度達(dá)到4.4 nM，遠(yuǎn)高于其相應(yīng)K_D，反應(yīng)達(dá)到平衡均超過20h。這二種抗原抗體的結(jié)合均表現(xiàn)出*的親和力，如果僅單獨研究親和力無法獲知反應(yīng)達(dá)到平衡的時間。

Antibody-antigen interactions: What is the required time to equilibrium?Andersson K etc., Nature Preceedings (2010) 

LigandTracer Green

熒光標(biāo)記檢測，對FITC標(biāo)記的化合物或其它具有相同激發(fā)波長和發(fā)射波長的熒光標(biāo)記物進(jìn)行實時觀察。

可選擇的檢測器：

*藍(lán)色（488nm）-綠色（535nm）FITC和其它類似熒光標(biāo)記

*黃色（590nm）-紅色（632nm）TexasRed和其它類似熒光標(biāo)記

*紅色（632nm）-近紅外（670nm）Alexa Fluor和其它類似熒光標(biāo)記

應(yīng)用

相同的親和力，不同的動力學(xué)

親和力是生物分子反應(yīng)達(dá)到平衡（穩(wěn)態(tài)）時的理論，它反映結(jié)合的強(qiáng)度。動力學(xué)是研究分子間是怎樣相互作用并達(dá)到穩(wěn)態(tài)的，反映結(jié)合的快慢。

LigandTracer實時反映動力學(xué)互作全過程，相同的親和力，卻有二種不同結(jié)合解離的動力學(xué)過程。這是傳統(tǒng)終點飽和法無法獲知的。對于fast on- fast off類型的蛋白互作來說，它可能在短時間內(nèi)即達(dá)到平衡后不久開始解離，但若孵育時間長可能會在洗脫過程之前就開始解離、當(dāng)洗脫后可能已全部解離，終點法測定會誤以為根本沒有結(jié)合；而對slow on- slow off類型來說，為達(dá)到動態(tài)平衡往往需要數(shù)小時甚至數(shù)天，但因曲線趨勢變化很微弱，往往會被誤以為已經(jīng)達(dá)到平衡；如果單獨靠進(jìn)一步延長孵育時間，又存在抗體蛋白被細(xì)胞代謝掉的危險，從而結(jié)果也不準(zhǔn)確。這些動力學(xué)相關(guān)的信息在新藥篩選方面會更加有用，

參考文獻(xiàn)